维普资讯 http://www.cqvip.com ２００５年第７期 内蒙古石油＋Ｌ＿ｒ－ ３ 高效液相色谱在药物分析中的应用研究进展 张良晓 （中国地质大学（武汉）材料科学与化学工程学院，武汉４３００７４） 摘 要 本文综述高效液相色谱法作为药物分析的常规方法，药物动力学研究，药物含量测定等药 物分析上的应用研究进展，并对应用研究的方向进行了预测。 关键词 高效液相色谱；药物分析；应用研究；进展 高效液相色谱法（Ｈｉｇｈ—Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｉ ｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＨＰＬＣ）是以液体作为流动相，并 的应用 采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。高 效液相色谱对样品的适用性广，不受分析对象挥发 性和热稳定性的限制，因而弥补了气相色谱法的不 足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析 的约占２０ ，而８０ 则需用高效液相色谱来分析。液 相色谱根据分离机理的不同可分为液液分配色谱、 液固吸附色谱、离子交换色谱和排斥色谱（或凝胶渗 透色谱）…。高效液相色谱已经广泛应用于药物的 含量测定、组成分析、质量控制等方面Ｌ２Ｊ。 近年来高效液相色谱法在药物分析中占主要地 位。据美国药典２２版载，ＨＰＩ Ｃ在含量测定方法中 位居第一。其特点是分析速度快、分离效率高、检测 灵敏度高、检测自动化、适用范围广、组分易回收、样 品处理较简单［３ 。本文在按在药物分析中的作用从 以下几个方面综述了高效液相色谱法在药物分析的 研究进展。 １ 高效液相色谱作为常规分析方法在药物分析中 子河沉积物中重金属污染［Ｊ］．北京大学学报．２０００， ３６（４）：５２５—５３０． 高效液相色谱法作为药物分析中的最主要的分 析方法，常被作为常规分析和检验方法。近年来在这 个方面的研究比较多，刘树业．等…为时刻监控治疗 肝癌时的抗癌药物剂量即血中的药物浓度，提高疗 效，减少副作用，采用紫外一ＨＰＬｃ法对血中和组织 中的阿霉素浓度进行分析．用ＵＶ一２４０紫外分光光 度计，ＢＥｃＫＭＡＮ３３２型高效液相色谱仪，采用反向 色谱法．秦．等 ］针对近几年国际奥委会医学委员会 公布的禁用表中新增药物及一系列利尿剂的相关化 合物进行了研究，比较了不同的提取方法及回收率， 研究了几种药物的排泄情况，建立了同时分析１３种 利尿剂的高效液相色谱测定方法，检出限小于５ｎｇ。 左雄军．等Ｌ６］用０．０２ｍｏｌ／Ｉ 的三羟甲基胺基甲烷（用 磷酸调ｐＨ值至７）和甲醇（含２ 乙酸和０．２５ 庚烷 磺酸钠）作流动相进行梯度洗脱，建立了脂性油膏药 物中黄芩甙含量的反相高效液相色谱分析方法，本 法分析速度快，重现性好，黄芩甙的平均回收率为 １０３．７ 。张晓青．等 ］采用反相离子对高效液相色 ２５（２）：７—９． ［３］王贵 胶州湾李村河口沉积物重金属及稀土元素演化 模式与环境记录［Ｄ］．长春：吉林大学图书馆，２００３ Ｅ４］ 廉雪琼．广西近岸海域沉积物中重金属污染评价［Ｊ］ 海洋环境科学，２００２，２１（３）：３９～４２． ［５］ 李任伟．沉积物污染和沉积环境学［Ｊ］ 地球科学进展， １９９８，ｌ３（４）：３９８～４０ ［８３ 刘文新，栾兆坤，汤鸿霄．乐安江沉积物中重金属污染 的潜在生态风险评价［Ｊ］．生态学报，１９９９，１９（２）：２０６ ２１１． ［９］ 刘芳文，颜文，王文质，古森昌，陈忠．珠江口沉积物重 金属污染及其潜在生态危害评价口］．海洋环境科学， ２００２，２１（３）：３４—３８． ｒｌ０］ 许金生，冯泳兰，袁亚莉，邓健，陈文．大源渡库区表层 ［６］ 柳林，许世远，陈振楼，余佳 上海滨岸潮滩表层沉积物 沉积物中重金属污染状况［Ｊ］．环境化学，２００２，２１ （１）：１Ｏ０—１０２ 中重金属的空间分布与环境质量评价［Ｊ］ 上海地质， ［７］ 腾彦国，庹先国．倪师军，张成江．应用地质累积指数评 价沉积物中重金属污染［Ｊ］．环境科学与技术，２００２， 第一作者简介：王贵（１９６１一），男，汉族，内蒙古包头市 人，教授，主要从事环境地球化学研究工作。 Ｔｈｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｈｅａｖｙ ｍｅｔａｌ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｄｉｍｅｎｔｓ ｏｆ Ｊｉａｏｚｈｏｕ Ｂａｙ ＡＮＧ Ｇ ，ｙＡ０ Ｄｅ （Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｂａｏｔｏｕ Ｔｅａｃｈｅｒ’Ｓ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｂａｏｔｏｕ，Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ ０１ ４０３０） （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｚｉｂｏ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ ２５５０９１） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐｃｌｔｅｎｔｉａｌ ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｉｓｋ（ＲＩ）ａｎｄ Ｇｅｏａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ（Ｉｇｅｏ）ｗｅｒｅ ａｐｌｉｅｄ ｆｏｒ ｈｅａｖｙ ｍｅｔａｌ Ｄ０ｌｌｕｔｉ０ｎ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｉｎ Ｊｉａｏｚｈｏｕ Ｂａｙ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｉｄｄｌｅ ｌｅｖｅｌ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｅｘｉｓｔｅｄ ｉｎ ｊｉａ０ｚｈ０ｕ Ｂａｖ．Ｔｈｅ Ｉｇｅｏ ｉｎｄｅｘｅｓ ｗｅｒｅ ｆｒｏｍ １ ｔｏ ４ ａｎｄ ＲＩ ｖａｌｕｅｓ ｗｅｒｅ ｍｏｓｔｌｙ ｂｅｔｗｅｅｎ １００￣３００．Ａ ｈｉｇｈｅｒ ＲＩ ｖａｌｕｅ ０ｆ ａｂｏｕｔ ６００ ｗａｓ ａｐｐｅａｒｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｄｉｍｅｎｔｓ ｏｆ Ｈａｉｐｏ Ｒｉｖｅｒ ｅｓｔｕａｒｙ’ｗｈｉｃｈ ｓｈｏｗｅｄ ｆｌ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ— ｌｙ ｈ ａｖｉｅｒ ｐ０ｌｌｕｔｉ０ｎ ｅｘｉｓｔ ｔｈｅｒｅ．Ｔｈｅ ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｉｓｋ ｆｏｒ ｈｅａｖｙ ｍｅｔａｌｓ ｗａｓ Ｃｄ＞Ｐｂ ＞Ｃｕ＞Ａｓ＞Ｚｎ． ＫｅＹ ｗｏｒｄｓ：Ｊｉａｏｚｈｏｕ Ｂａｙ；ｓｅｄｉｍｅｎｔ；ｈｅａｖｙ ｍｅｔａｌ；ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ａｓｓ；ｅｓｓｍｅｎｔ 收稿日期：２００５年６月２８日 维普资讯 http://www.cqvip.com ４ 内蒙古石油４Ｌ＿ｒ－＿ ２００５年第７期 谱法研究了唑来膦酸及其有关化合物的色谱分析与 分离方法。优化的分离条件：以ＨｙｐｅｒｓｉｌＣ８柱为固 定相，以甲醇５ｍｍｏｌ／Ｉ 磷酸二氢钠缓冲液（含 ６ｒｅｔｏｏｌ／ｉ 四丁基溴化铵溶液，用氢氧化钠溶液调节 ｐＨ至７．０）（体积比为２Ｏ：８０）为流动相，等度洗脱， 流速为１．０ｍｌ ／ｍｉｎ，紫外检测波长为２２０ｎｍ，柱温为 室温。在该色谱条件下，唑来膦酸与有关化合物（包 括其合成过程中残余的原料咪唑乙酸和其他氧化分 解产物）的分离良好，与保留时间最接近的杂质峰的 分离度大于２．５。该方法不需进行复杂的样品处理， 简单快速，适用于唑来膦酸的常规分析。 另外，国内在这个方面的研究还在兴奋剂中几 种易分解药物 ｊ，乙酰螺旋霉素活性成分［ｇ］，血或尿 中咪达唑仑及其代谢物＿１ ，饲料中八种磺胺药 物 １ ，山羊血浆中三苯双脒＿１ ，嘌呤类化合物Ｄ ３］等 药物上。这些研究充分利用了高效液相色谱的操作 简单，灵敏度高，回收率高的特点，利用高效液相色 谱与其他检测方法联用，在最佳吸收峰、检出线、精 密度上进行了研究。 ２ 高效液相色谱在药物动力学研究进展 高效液相色谱测定药物在肌体内的浓度，并结 合一定的统计方法对数据进行处理可以对药物代谢 动力学进行研究。刘湘新．等ｎ 对家免单剂量静注 和灌服儿茶素（Ｃａｔｅｃｈｉｎ）２５ｍｇ／ｋｇ体重各５只。用 高效液相色谱法测定其血药浓度。房室模型分析表 明，注给药后的药时数据符合无吸收二室开放模型， 儿茶素在健康家免体内的药动学特征是：吸收迅速， 达峰时间短，消除快，半衰期短，表观分布容积较大， 口服摄入吸收不完全。张祚新．等 应用ＨＰＩ Ｃ法测 定了单次混饲口服氧氟沙星（１０ｍｇ／ｋｇ）后，鲤鱼体 内不同时问的血浆药物浓度。利用ＭＣＰＫＰ药代动 力学软件分析数据，其药代动力学特征符合一级吸 收一室开放模型，结果表明，氧氟沙星在鲤鱼体内吸 收较迅速，达峰时间较短，血药峰浓度高，消除缓慢， 保持有效杀菌浓度时间长，适用于鱼类细菌性疾病 的预防和治疗。李克．等 建立了反相高效液相色 谱法监测人口服地尔硫卓缓释片后血药浓度。血样 用正己烷一氯仿一异丙醇混合溶剂（６０：４０：５）提取 后，以Ｃ１８化学键合硅胶为固定相，甲醇一水一三乙 胺为流动相，安定为内标，在２３９ｎｍ波长处定量检 测。Ｉ札药浓度在１５～３００ｔｌｇ／Ｉ 范围内线性关系良好， 最低检测浓度为３￣ｇ／Ｉ 。批内（ｎ一７）及批间（ｎ＝＝＝５） 测定相对标准偏差分别小于６，８ 和８．４ ，回收率 为９１ ～１０４ 。监测了８名健康人口服盐酸地尔硫 卓缓释片后的不同时间的皿药浓度变化，计算了有 关的药代动力学参数。 高效液相色谱在药物代谢动力学上的研究主要 是为药物代谢动力学软件提供数据，并最终通过药 代动力学软件处理得到药物动力学结果。其中动力 学参数主要集中在：吸收半衰期（ｔ 。）、消除半衰期 （ｔｌ，２８）、达峰时问（ｔ～）、最大血药浓度（ｃ ）、曲线下 面积ＡＵＣ、消除率ｃＩＢ、表观分布容积Ｖｄ等。通过这 些动力学参数对药物代谢动力学进行研究，并通过 这种方法对药物对机体的作用情况进行比较，有利 的指导药物的开发和研制，在这个方向的研究可能 是高效液相色谱与药代动力学软件联用分析的发展 方向。 ３ 高效液相色谱在药物含量的测定研究应用进展 高效液相色谱法在药物含量的测定在药物分析 中是主要的一个方面，是一种及分离和测定为一体 的分析方法，主要的特点是：专一性强，灵敏，快速简 便。下面按应用的不同从以下几个方面论述近年来 的研究进展情况。 ３．１ 高效液相色谱在药物（含草药）成分含量测定 上的应用 在药物分析中，高效液相色谱由于其专一性，灵 敏度高，快速简便的特点，广泛的应用于药物分析中 的定量分析，尤其在干扰因素较多的时候表现出更 大的优越性。关日晴［１ ］采用高效液相色谱法测定盐 酸洛美沙星滴眼液中的洛美沙星含量；用Ｃ柱为分 离柱，０．０２ｔｏｏｌ／ｎｍ酸溶液（用三乙胺调节ｐＨ值至 ２．６）一乙腈（体积比８５：１５）为流动相，检测波长 ２８７ｎｍ；洛美沙星进样量在０．４８～０．７２ ｇ范围内与 峰面积线性关系良好（ｒ一０．９９９８），平均回收率１００． ４ ，重复进样的ＲＳＤ０．３３ （ｎ一６）。李克．等［ 应 用反相高效液相色谱法检测了雷公藤提取物中雷公 藤甲素的含量。样品经洗脱提取后，以Ｃ１８化学键合 硅胶为固定相，乙腈一水（４０：６０，ｖ／ｖ）为流动相， 用２１０ｎｍ波长定量检测。测定结果表明，雷公藤甲 素浓度在０．２５～４．００ｍｇ／Ｉ 范围内线性良好，最低 进样检测浓度为０．１ｍｇ／Ｌ。批内（ｎ一５）及批间（ｎ一 ５）测定相对标准偏差分别为１．９％～６．５％和２．７％ ７．８％，回收率为８９．８％～９２．０％。此外国内还对 喹诺酮类抗菌药ｎ 、复方阿莫西林粉中阿莫西林和 克拉维酸口 、复方感冒液［ｚ１］、芩连口服液中黄芩 苷口 、氢溴酸右美沙芬片 、饲料中氯羟吡啶［２ 、注 射用硫酸奈替米星［２ 、小诺霉素中Ｃ２ｂ［２ 、保健食品 中的西地那非和西力士［２ 、植物愈伤组织中的喜树 碱及其衍生物［２ 、饲料中十三种磺胺类药物［ ］等药 物的测定进行了研究。 在利用高效液相色谱法进行测定与其他技术联 用，检测器一般有紫外分光光度计，质谱等。这些精 密的检测器决定了分析的灵敏度，对于分析起着重 要的重要，是高效液相色谱分析法中重要的组成部 分。 ３．２ 高效液相色谱在药物残留测定上的应用 由于高效液相色谱能够对含量复杂组分进行定 量分析，被广泛使用于药物残留的测定上。周东海． 等口。］以高效液相色谱法建立了猪、羊、鸡肝组织中 西维因残留量的检测方法。采用（）ＤＳ色谱柱，二极 管阵列检测器，甲醇／水（６５／３５）为流动相，２２２ｎｍ 检测波长下进行检测。西维因对照品溶液的最低检 测限为０．１ｍｇ／Ｉ ，线性范围为０．１～２０ｍｇ／Ｉ ，标准曲 线回归方程为：Ｙ一一２２４５９，８３＋４５４６８４，３１Ｘ，线性 关系良好（ｒ一０．９９９９）。样品以乙腈提取，并加入无 水硫酸钠和正已烷，过滤后去除杂质，乙腈层在４５～ ５０℃下水浴氮气吹干，残渣用甲醇溶解后，进样分 析。平均回收率均大于８０％，日间和日内变异系数均 小于１０％。符合药物残留痕量分析要求。林海丹． 等＿３”研究了动物源性食品中甲氧苄胺嘧啶药物残 留的提取、净化和高效液相色谱分析条件，建立了高 效液相色谱法测定动物性食品中甲氧苄胺嘧啶药物 残留的方法，该法检测限０．０２５ｍｇ／ｋｇ，回收率为 ８４ ～９８ 。此外。在人血中药物含量的测定中也有 很多的应用。金鸣．等＿３ ］建立了血浆及尿液中异烟 肼的高效液相色谱快速测定方法。以满足临床药物 分析和法医学鉴定的需要，提高对血浆及尿液中异 烟肼浓度检测的准确性。以香草醛为衍生化试剂，将 异烟肼经柱前衍生为异烟肼香草醛腙。直接对处理 后样品中的腙进行定性、定量分析。以在空白人体液 样本中定量添加标准异烟肼的方法考察了样品的前 处理方法、仪器条件、线性范围、精密度、回收率等， 并对健康受试者血液中的异烟肼浓度进行了监测。 结果表明，方法的线性范围为０．２ｍｇ／Ｉ ～１２．０ｒａｇ／ 维普资讯 http://www.cqvip.com ２００５年第７期 张良晓 高效液相色谱在药物分析中的应用研究进展 ５ Ｉ ；检测限为ｏ．２ｒａｇ／Ｉ ；日内、日间精度均小于４．Ｏ％ （ｎ一５）；回收率在９６．３ 以上。该方法快速、准确、 实用，适用于临床药物浓度监测、法医毒物分析和药 代动力学等相关研究。本方法在药物评估，法医鉴定 等方面有很大应用前景。 ４结束语 鲤鱼体内的药代动力学［Ｊ］，中国兽医学报，２００４．２４ （４）：３８３～３８５． ［１６］ 李克，张昕，袁倚盛．等，人血清中地卓尔硫高效液相 色谱法测定及药代动力学参数［Ｊ］，色谱，１９９７．１５ （５）：４５１～４５３， 高效液相色谱法由于分析速度快、分离效率高、 检测灵敏度高、检测自动化、适用范围广、组分易回 收、样品处理较简单等优点在确定药方案和治疗剂 量，以及药物动力学分析和药效学评价提供了方法 的基础，有着广泛的应用前景。 参考文献 ［１］ 成都科学技术大学分析化学教研室．分析化学手册 （第四册．下册）光谱分析［Ｍ］，北京：化学工业出版社， １９８４．８． ［１７３ 关日晴．ＨＰＩ Ｃ法测定盐酸洛美沙星滴眼液中的洛 美沙星含量［Ｊ］，分析测试学报，２００４．２３（１）：ｌ２～ １１３． ［１８］ 李克，袁倚盛，戴晓莉．等，反相高效液相色谱法测定 雷公藤提取物中雷公藤甲素含量［Ｊ］，色谱，１９９８．１６ （４）：３５６～３５７． Ｃ测 ［１９］ 孙雨安，王国庆，崔泉中．司帕沙星含量的ＨＰＩ定［Ｊ］，分析测试学报，２０００．１９（１）：６２～６４． 胡海燕．高效液相色谱法测定复方阿莫西林粉中阿 ［２ｏ３ 莫西林和克拉维酸含量［Ｊ］，中国兽药杂志，２００２．３６ （９）：３Ｏ～３１． ｒ２］ 朱业晋，张杰．ＨＰＩ，Ｃ—ＥＩ ｓＤ在药物分析中的应用进 展［Ｊ］，赣南师范学院学报，２００３．１２（６）：３９～４１． ｒ３］ 胡春松，罗伟．高效液相色谱在心血管疾病研究中的 应用［Ｊ］，江西医药，１９９７．３２（１）：４９～５２． ［４３ 刘树业，陈秀琴，张志友．血液和组织中抗癌药物阿霉 素的紫外一ＨＰＩ ｃ分析［Ｊ］，天津师范大学学报（自然 科学版），２００２．２２（１）：５７—６０． ［２１］ 邓思珊，郑金春．高效液相色谱法测定复方感冒液多 组分含量［Ｊ］，色谱，１９９７．１５（１）：５１—５３． ［２２］ 董玉中，陈萍．高效液相色谱法测定芩连口服液中黄 芩苷的含量［Ｊ］，安徽医药，２００５．９（１）：３８～３９． ［２３］ 刘涟，李亮．高效液相色谱法测定氢溴酸右美沙芬片 的含量［Ｊ］，化学世界，１９９５（９）：４８２～４８４． ［２４］ 李俊玲，强莉，宫玲玲．等，高效液相色谱法测定饲料 中氯羟吡啶［Ｊ］，山东畜牧兽医，２００４：３３￣３４． ［２５３ 张锁西，张福珍．高效液相色谱反相离子法测定注射 用硫酸奈替米星含量［Ｊ］，江西中医学院学报，２００４． １６（６）：６６． ［５３ 秦，朱绍棠，王超．等，十三种利尿剂的高效液相色谱测 定方法［３３，分析测试学报，２００３．２（１）：４１—４４． ｒ６］ 左雄军，徐友志，徐秉坤．脂性油膏药物中黄芩甙含量 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