纤维素的测定
比色法
纤维素由葡萄糖基组成,它是组成植物细胞壁的基本成分。其含量的多少关系到植物的机械组织 是否发达, 作物抗倒伏、 抗病虫害的能力是否较强,并且影响到粮食作物、 纤维作物和蔬菜作物等的产 量和品质。
在各种粮食中纤维素的含量各不相同,与籽粒皮层厚薄成正比。同种粮食中,原粮纤维素 维素含量最高,加工粗加工精度越高,纤维素含呈越少,如小麦标准粉约
O. 7%.稻谷约 9.0 %,糙米
约 1.0 %,白米约 0 4 %。因此,根据纤维素的含量的测定,可以判别籽粒皮层的厚薄,粮食加工精度 高低和营养价值评估。
纤维素的测定方法有酸碱醇醚法、酸性洗涤剂法、碘量法及比色法。第一个是国标法,但比较繁琐, 后者操作比较简单。
一、方法原理 纤维素是由葡萄糖基组成的多糖,在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖。然后在浓硫酸作用下,使 单糖脱水生成糠醛类化合物。利用蒽酮试剂与糠醛类化合物的蓝绿色反应即可进行比色测定。 二、仪器和试剂
1 .主要仪器 恒温水浴、冰罐、电炉、玻璃坩埚、漏斗、定时钟、分光光度计等。 2 .试 剂 60 % H 2SO4溶液、浓 H2SO4。
2 %蒽酮试剂: 2g 蒽酮溶解于 100rnl 乙酸乙酯中,贮置于棕色试剂瓶中。
纤维素标准液:准确称取 100mg 纯纤维素,放入 100Inl 量瓶中,将量瓶放入冰浴中,然后加冷的 60%
H2SO4 60— 70ml ,在冷的条件下消化处理 20 —30min,然后用 60% H2SO4稀释至刻度,摇匀。吸取 此液 5.0ml 放入另一 50ml量瓶中,将量瓶放入冰浴中,加蒸馏水稀释刻度,则每毫升含
100μg纤维
素。
三、操作步骤
1 .绘制纤维素标准曲线
(1)取 6支小试管,分别放入 0、 0.40 、0.80 、 1.20 、1.60 、2.00ml 纤维素标准液。然后分别加 入
2.00 、1.60 、 1.20 、0.80 、 0.40 、0ml蒸馏,摇匀。则每管依次含纤维素 200μ g。
0、40、 80、120、160、
( 2)向每管加 0. 5ml% 蒽酮试剂,再沿管壁加 5. 0ml 浓 H2SO4,塞上塞子,微微摇动,促使乙酸 乙酯水解,当管内出现蒽酮絮状物时,再剧烈摇动促进蒽酮溶解,然后立即放入沸水浴中加热 10min , 取出冷却。
( 3)在分光光度计上 620urn 波长下比色,测出各管消光值 。 (4)以所测得的消光值为纵坐标,以纤维素含量为横坐标,绘制纤维素标准曲线。
2. 样品的测定
( 1)准确称取风干的样品 100mg,放入 100rnl 量瓶中,将量瓶放入冰浴中,加冷的 60%H2SO4。
60— 70ml,在冷的条件下消化处理半小时,然后用 60%H2SO4。稀释至刻度,摇匀,用玻璃坩埚漏斗过
滤。
(2)吸取上述滤液 5.0ml,放入 5ml 量瓶中,将量瓶置于冰浴中,加蒸馏水释至刻度,摇匀。 (3)吸取上液 2.0ml ,加 0.5ml 2 % 蒽酮试剂,再沿管壁加 5. 0ml浓 H2SO4 ,盖上塞子,以后 操作同纤维素标准液,测出样品在 620urn 波长下的消光值。 四、结果计算
以样品测定消光值, 在标准曲线上查出相应的纤维素含量, 然后均按下式计算样品中纤维素含量:
X= A*10 *C*100
B
-6
-6
式 中: A— —在标准曲线上查得的纤维素含量值(μ g) ;
B
— — 样品重( g )
10 -6 — — 将μ g 换算成 g 的系数 C X
— — 样品稀释倍数
— —样品中纤维素含量(%)
五、说明 1 .此法需用纯纤维素样品作标准曲线。
2.纤维素加 60%H2SO4 时,一定要在冰浴条件下进行。
参考文献:作物品质分析 农业出版社 主编:牛森
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