PrimeSTAR® HS DNA Polymerase
使 用 说 明 书
Takara Code : DR010A 包 装 量：250 Units 制品说明 PrimeSTAR® HS DNA Polymerase是兼具高保真性和高扩增效率的PCR用DNA聚合酶。因其具有极强的3’→5’Exonuclease活性而显示出超群的校正功能，同时还具有优于Taq DNA Polymerase的高扩增效率。制品中添加了在常温状态下能够抑制DNA Polymerase活性及3’→5’Exonuclease活性的抗体，有效防止PCR反应前的引物错配和引物消化。与最适反应Buffer配合使用，可以实现对广泛靶序列的高保真性、高灵敏度、高特异性、高成功率的扩增，对于cDNA克隆等要求高保真的PCR反应发挥最强大的威力。扩增得到的PCR产物几乎都为平滑末端，可直接克隆于平滑末端的载体中。
制品内容（ 250 U）
PrimeSTAR® HS DNA Polymerase（2.5 U/μl） 100
μl 5×PrimeSTAR® Buffer（Mg2+ plus）* 1 ml×2
dNTP Mixture（各2.5 mM） 800 μl * Mg2+浓度（5×）为5 mM。
保 存 : -20℃
dNTP Mixture
浓度 各2.5 mM 状态 水溶液（Na盐，pH7.0～9.0）
纯度 各98%以上 * dATP、dGTP、dCTP、dTTP的等摩尔混合物， 不用稀释可直接用于PCR反应。 活性定义 用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，
摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
纯 度
1） 10 U的本酶和0.6 μg的λ-Hind III在74℃下反应1小时，DNA
的电泳谱带不发生变化。
2） 10 U的本酶和0.6 μg的Supercoiled pBR322 DNA在74℃下
反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
用 途
PCR法扩增DNA片段。 PCR反应性能 1） 以λ DNA为模板，可以很好地扩增8、10、12、15 kb的DNA片段。 2） 以人基因组DNA为模板，可以很好地扩增0.5、1、2、4、6、8 kb的DNA片段。
实验操作程序 1.
按下列组份配制PCR反应液。
5×PrimeSTAR® Buffer（Mg2+ plus） 10 μl dNTP Mixture（各2.5 mM） 4 μl Primer 1（10 μM） 1 μl Primer 2（10 μM） 1 μl 模板DNA* ＜200 ng PrimeSTAR® HS DNA Polymerase（2.5 U/μl） 0.5 μl 灭菌蒸馏水 up to 50 μl * 【50 μl PCR反应体系中模板DNA推荐使用量】
人基因组DNA 5 ng~200 ng（<200 ng） 大肠杆菌基因组DNA 100 pg~100 ng λ DNA 10 pg~10 ng 质粒DNA 10 pg~1 ng 2. PCR反应条件设置如下： ① 3 Step法 98℃ 10 sec 55℃ 5 sec或15 sec 30 Cycles
72℃ 1 min/kb ② 2 Step法 98℃ 10 sec
68℃ 1 min/kb 30 Cycles * 本酶具有高退火效率，所以在设定PCR条件时可以缩短退火
时间。 应用例 【以λ DNA为模板扩增8、10、12、15 kb的DNA片段】
1.
按下列组份配制PCR反应液。
5×PrimeSTAR® Buffer（Mg2+ plus） 10 μl dNTP Mixture（各2.5 mM） 4 μl Primer 1（10 μM） 1 μl Primer 2（10 μM） 1 μl λDNA（10 pg/μl） 1 μl PrimeSTAR® HS DNA Polymerase（2.5 U/μl） 0.5 μl 灭菌蒸馏水 up to 50 μl 2.
PCR反应条件。 98℃ 10 sec.
68℃ 4 min.
30 Cycles
3. PCR扩增结果。 M 1 2 3 4 M 1% Agarose gel 5 μl电泳结果 M：λ-Hind III digest DNA Marker* 1：8 kb PCR产物 2：10 kb PCR产物 3：12 kb PCR产物 4：15 kb PCR产物 *Takara Code：D3403A 【以人基因组DNA为模板扩增0.5、1、2、4、6、8 kb的DNA片段】 1.
按下列组份配制PCR反应液。 5×PrimeSTAR® Buffer（Mg2+ plus） 10 μl dNTP Mixture（各2.5 mM） 4 μl Primer 1（10 μM） 1 μl Primer 2（10 μM） 1 μl 人基因组DNA（100 ng/μl） 1 μl PrimeSTAR® HS
DNA Polymerase（2.5 U/μl） 0.5 μl 灭菌蒸馏水 up to 50 μl
2.
PCR反应条件。 98℃ 10 sec.
68℃ 8 min. 30 Cycles
3. PCR扩增结果。 M 1 2 3 4 5 6 M 1% Agarose gel 5 μl电泳结果 M：λ-Hind III digest DNA Marker* 1：0.5 kb PCR产物 2：1 kb PCR产物 3：2 kb PCR产物 4：4 kb PCR产物 5：6 kb PCR产物 6：8 kb PCR产物 *Takara Code：D3403A 注意事项 1. PCR的反应液的配制可以在室温下进行，但DNA聚合酶等各种
试剂在配制前请于冰上放置。
2. 因本酶具有高退火效率，使用本酶进行三步法PCR反应时，退
火时间不宜过长，只需设定5 sec或15 sec（常规为30 sec）。
NOTICE TO PURCHASER: LIMITED LICENSE
[M54] PrimeSTAR® HS DNA Polymerase
This product is covered by the claims of U.S. Patent No. 7,704,713 and its foreign counterparts
[L15 ] Hot Start PCR
Licensed under U.S. Patent No. 5.338,671 and 5,587,287, and corresponding patents in other countries.
V2012.02
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