11.土壤有机磷分组测定-Bowman,1978

土壤有机磷组分测定（Bowman-Cole法）

按土壤有机磷在不同浓度的酸碱溶液中的水解量，分成4组活性不同的有机磷：1.活性

有机磷——碳酸氢钠溶液[c(NaHCO3)=0.5mol/L]提取的有机磷；2.中等活性有机磷——硫酸溶液[c(H2SO4)=1.0mol/L]和氢氧化钠溶液[c(H2SO4)=1.0mol/L]提取的有机磷；3.中等稳定性有机磷——富里酸磷：能溶于氢氧化钠溶液[c(NaOH)=0.5mol/L]在pH1~pH1.8的条件下不发生沉淀但难为植物吸收的磷；4.高稳定性有机磷——胡敏酸磷：能溶于氢氧化钠溶液[c(NaOH)=0.5mol/L]，在pH1~pH1.8的条件下发生沉淀又难为植物吸收的磷。

一．仪器设备：

分光光度计 二．试剂：

1.硫酸溶液[c(H2SO4)=1.0mol/L]：55ml浓硫酸（H2SO4,ρ=1.84g/cm3，分析纯）慢慢倒入500ml水中，冷却后定容1000ml。

2.氢氧化钠溶液[c(H2SO4)=1.0mol/L]：称取氢氧化钠（NaOH,分析纯）20g溶于500ml水中，冷却，定容于1000ml。

3.碳酸氢钠溶液[c(NaHCO3)=0.5mol/L，pH8.5]：称取碳酸氢钠（NaHCO3，分析纯）42g溶于水稀释至1L，用稀硫酸或氢氧化钠溶液调节pH至8.5。（其余试剂同水中磷的测定）

4.无水碳酸钠（Na2CO3,分析纯），磨细通过60孔筛。

5.硫酸溶液[c(1/2H2SO4)=6mol/L]:在800ml蒸馏水中缓慢加入浓硫酸（H2SO4,ρ=1.84g/cm3，分析纯）167ml，同时搅拌，待冷却后，加入蒸馏水定容到1000ml。

6.钼锑贮存溶液：浓硫酸（H2SO4，分析纯）153ml缓慢倒入约400ml蒸馏水中，同时搅拌，放置冷却。另称10g钼酸铵（[(NH4)6Mo7O24·4H2O,分析纯]）溶于约60℃的300ml蒸馏水中，冷却。将配好的硫酸溶液缓慢倒入钼酸铵溶液中，同时搅拌。随后加入酒石酸锑钾[ρ(KSbOC4H4O6·1/2H2O)=5g/L,分析纯]溶液100ml，最后用蒸馏水稀释至1000ml，避光贮存。

7.钼锑抗显色剂：1.50g抗血酸（C6H8O6,左旋，旋光度+21°~ +22°，分析纯）加入到100ml钼锑贮存液中。此液须随配随用，有效期一天。

8.二硝基酚指示剂：0.2g2，6—二硝基酚或是2，4—二硝基酚[C6H3OH(NO2)2]溶于100ml水中。

9.磷标准贮存溶液：0.4390g磷酸二氢钾（KH2PO4,分析纯，105℃烘2小时）溶于200ml蒸馏水中，加入5ml浓硫酸，转入1L容量瓶中，用水定容。此为磷标准溶液[ρ(P)=100mg/L]可以长期保存。

10.磷标准溶液：取磷标准贮存液准确稀释20倍，即为磷标准溶液[ρ(P)=5mg/L]，此溶液不宜久存。 三．操作步骤：

1.活性有机磷（OP）的测定.

称取通过2mm筛的风干土样5.00g于200ml三角瓶中，加100ml（0.5mol/L）碳酸氢钠溶液，再加一角勺无磷活性炭，在振荡机上振荡30min。立即用无磷滤纸过滤，滤液承接于100ml三角瓶中。

1.1滤液中总磷量（TP）的测定。

（1）取滤液20ml于50ml三角瓶中，置沸水浴上蒸干，加3ml浓硫酸摇匀，再加10滴高氯酸（HClO4）摇匀，在瓶口放一个弯颈小漏斗，置于电热板上加热消煮15min，使浓硫

酸发烟回流，全部消煮时间约30min。

（2）消煮液冷却后，用蒸馏水小心地由三角瓶洗入50ml量瓶内，轻轻摇动容量瓶，待溶液完全冷却后，用蒸馏水定容至刻度，充分摇匀，澄清或用无磷干滤纸过滤。

（3）取消煮后的待测液5ml于25ml容量瓶中，加水10ml及2，6—二硝基酚指示剂1滴，用稀酸或稀碱调节至淡黄色，准确加入钼锑抗指示剂2.5ml，摇匀，充分排除二氧化碳，用水定容，30min后于660nm处比色。 （4）工作曲线绘制：（同前）

取磷标准溶液0，1，2，3，4，5，6ml于50ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至约30ml，加磷钼锑抗指示剂5ml，摇匀，定容。即溶液浓度分别为0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6mg/L。

（5）结果计算：

(P)Vtsm

式中，—浸提出的活性有机磷和无机磷（TP）质量分数mg/kg。 （）

—从工作曲线上查得显色液中磷的浓度，mg/L。

V—显色液体积，mL。 ts—分取倍数。 m—土样质量，g。

两次平衡测定结果允许误差为0.02‰

1.2滤液中无机磷（IP）的测定

（1）取滤液5ml于25ml容量瓶，加2，6—二硝基酚1滴，用稀酸或稀碱溶液调节至微黄色，等二氧化碳充分放出后，加钼锑抗2.5ml，定容，30min后比色。 （2）工作曲线绘制（同上） （3）结果计算：

(P)Vtsm

式中，—土壤中活性无机磷（IP）质量分数mg/kg。 （）

—从工作曲线上查得显色液中磷的浓度，mg/L。

V—显色液体积，mL。

ts—分取倍数。 m—土样质量，g。

两次平衡测定结果允许误差为0.02‰ 1.3活性有机磷

=TP-IP （）（）式中，—土壤活性有机磷（OP）质量分数，mg/kg。

2.中等活性有机磷。

2.1中等活性有机磷1（OP1）

称取通过2mm筛的风干土壤2.00g于150ml三角瓶中，加1.0mol/L硫酸溶液100ml，摇匀，浸提小时后，用无磷干滤纸过滤，滤液承接于100ml三角瓶中。 （1）滤液中总磷量（TP2）测定。

取滤液20ml于100ml三角瓶中，置沸水浴蒸干，消煮，计算等步骤同上1.1。

（2）滤液中无机磷（IP1）测定。

取滤液20ml于100ml三角瓶中，加一角勺无磷活性炭，摇匀脱色，用无磷滤纸过滤，滤液承接于100ml三角瓶中，其余步骤见1.2。 （3）结果计算：

=TP1-IP1 （）式中，—中等活性有机磷（OP1）质量分数，mg/kg。 （）2.2中等活性有机磷2（OP2）测定。

上述用硫酸溶液[c(H2SO4)=1.0mol/L]处理的土壤过滤后，滤纸上残留的土壤用2ml～3ml乙醇洗涤，风干后置150ml三角瓶中，加1.0mol/L氢氧化钠溶液100ml，摇匀，浸提6小时后过滤，清液（A液）盛于100ml三角瓶中，取（A）液20ml于100ml三角瓶中，加一角勺无机活性炭，摇匀脱色，用无机磷滤纸过滤，滤液承接于100ml三角瓶中，余见1.2

2.3中等活性有机磷计算。 =OP1+OP2 （）3.中稳性有机磷。

取2.2中A液50ml于150ml三角瓶中，加浓盐酸酸化至Ph1.0～pH1.8，静置过夜，过滤。

3.1滤液中总磷量（TP）测定。

取滤液20ml于50ml三角瓶中，置沸水浴上蒸干。消蒸，比色，计算等同1.1。 3.2滤液中无机磷（IP）测定。

取滤液20ml于100ml三角瓶中，加一角勺无磷活性炭，摇匀脱色，用无磷滤纸过滤，滤液承接于100ml三角瓶中，余见1.2。 3.3结果计算： =TP-IP （）式中，—土壤中稳性有机磷（OP）质量分数，mg/kg。 （）4.高稳性有机磷。

取A液20ml于50ml三角瓶中，置沸水浴上蒸干，消煮，比色，计算等同1.1，测得A液中总磷（TP），则A液中的有机磷（OP）=TP-IP2(中等活性有机磷2)。A液中的有机磷即为富里酸磷和胡敏酸磷之和，其中减去富里酸磷便为高稳定性有机磷—胡敏酸磷。